olga:olgaplasmidminipraep

Differences

This shows you the differences between two versions of the page.

Link to this comparison view

Both sides previous revision Previous revision
Next revision		 Previous revision
olga:olgaplasmidminipraep [2020-04-10 02:32] – danieldolga:olgaplasmidminipraep [2025-11-09 09:25] (current) – external edit 127.0.0.1
Line 1: Line 1:
  
-==== DNA Plasmid Präparation (MiniPräp) ====+==== DNA Plasmidpräparation (Minipräp) ====
  
-Die Plasmidpräparation (auch Plasmidisolierung) ist eine molekularbiologische Methode zur Isolierung von Plasmid-DNA. Die Bezeichnung "Mini-" stammt von der minimalen Menge mit denen gearbeitet wird. Es gibt nämlich auch die Midi- oder Maxi-Präp mit größeren Volumina.+Die Plasmidpräparation (auch Plasmidisolierung) ist eine molekularbiologische Methode zur Isolierung von Plasmid-DNA. Die Bezeichnung "Mini-" stammt von der minimalen Menge mit denen gearbeitet wird. Es gibt nämlich auch die Midi- oder Maxipräp mit größeren Volumina.
  
  
-==== Lösungen für die Minilysatpräparation von Plasmid DNA ====+Im OLGA gibt es einfertiges DIY-Minipräp-Kit mit den Lösungen und der Anleitung. Dieses kann/darf/soll ein jeder benutzen. 
 + 
 +[[https://galley.realraum.at/_data/i/upload/2018/12/01/20181201172452-90210fd6-me.jpg|{{https://galley.realraum.at/_data/i/upload/2018/12/01/20181201172452-90210fd6-me.jpg?300x500}}]] 
 + 
 +==== Lösungen für die Minilysatpräparation von Plasmid-DNA ====
  
 **Lösung I:** (400 µL) **Lösung I:** (400 µL)
Line 45: Line 49:
 2) Schütteln: Lösung II bildet Schaum wegen SDS. 2) Schütteln: Lösung II bildet Schaum wegen SDS.
  
-3) Lösung 1 bleibt übrig.+3) Lösung 1 bleibt nach Ausschlussverfahren übrig.
  
  
Line 52: Line 56:
 ==== Durchführung: ==== ==== Durchführung: ====
  
-1. Bakterien werden aus 3 ml ONC geerntet. Dazu 1,5 ml ONC in ein Eppendorfgefäß+1. Bakterien werden aus 3 ml ONC geerntet. Dazu 1,5 ml ONC in ein Mikroreaktionsgefäß
 (Eppi) füllen und 1 min x 10,000 rpm in der Tischzentrifuge zentrifugieren. Entfernen (Eppi) füllen und 1 min x 10,000 rpm in der Tischzentrifuge zentrifugieren. Entfernen
 des Überstands. Erneut 1,5 ml ONC in Eppi füllen und Zentrifugation wiederholen. des Überstands. Erneut 1,5 ml ONC in Eppi füllen und Zentrifugation wiederholen.
Line 64: Line 68:
  
 4. Zugabe von vorgekühlter (Eis!) 400 µl 2,8M Kaliumacetatlösung, pH 5,1 und gut mischen 4. Zugabe von vorgekühlter (Eis!) 400 µl 2,8M Kaliumacetatlösung, pH 5,1 und gut mischen
-(kippen/ invertieren), aber nicht vortexen! Es entsteht ein weißer, flockiger Niederschlag.+(kippen/invertieren), aber nicht vortexen! Es entsteht ein weißer, flockiger Niederschlag.
 Das Eppi 15 min auf Eis stellen. Das Eppi 15 min auf Eis stellen.
  
Line 70: Line 74:
  
 6. ca. 800 µl Überstand wird ohne Flocken in ein frisches Eppi überführt, mit 600 µl 6. ca. 800 µl Überstand wird ohne Flocken in ein frisches Eppi überführt, mit 600 µl
-Isopropanol gemischt (kippen/ invertieren), aber nicht vortexen!+Isopropanol gemischt (kippen/invertieren), aber nicht vortexen!
  
 7. Zentrifugation für 15 Minuten bei 4°C und 10.000 rpm (Eppendorf-Zentrifuge), um DNA 7. Zentrifugation für 15 Minuten bei 4°C und 10.000 rpm (Eppendorf-Zentrifuge), um DNA
Line 81: Line 85:
  
 9. 3 µl der gelösten Plasmid DNA werden in ein neues Eppi überführt und für nachfolgende 9. 3 µl der gelösten Plasmid DNA werden in ein neues Eppi überführt und für nachfolgende
-Schnitt-Kontrollen bei -20°C gelagert. Eppi gut beschriften!+Schnittkontrollen bei -20°C gelagert. Eppi gut beschriften!
  
-10. 15µl der restlichen Plasmid DNA für den Restriktionsansatz verwenden und die+10. 15µl der restlichen Plasmid-DNA für den Restriktionsansatz verwenden und die
 verbleibende Plasmid DNA bei -20°C aufbewahren. Eppis gut beschriften! verbleibende Plasmid DNA bei -20°C aufbewahren. Eppis gut beschriften!
  
  • /srv/dokuwiki/data/attic/olga/olgaplasmidminipraep.1586485938.txt.gz
  • Last modified: 2025-11-09 09:24
  • (external edit)