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| olga:olgaplasmidminipraep [2020-04-10 02:24] – [Rätsel:] danield | olga:olgaplasmidminipraep [2025-11-09 09:25] (current) – external edit 127.0.0.1 | ||
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| - | ** Baustelle ** | ||
| - | ==== DNA Plasmid Mini-Präp | + | ==== DNA Plasmidpräparation (Minipräp) |
| + | Die Plasmidpräparation (auch Plasmidisolierung) ist eine molekularbiologische Methode zur Isolierung von Plasmid-DNA. Die Bezeichnung " | ||
| - | ==== Lösungen für die Minilysatpräparation von Plasmid DNA ==== | + | |
| + | Im OLGA gibt es einfertiges DIY-Minipräp-Kit mit den Lösungen und der Anleitung. Dieses kann/ | ||
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| + | ==== Lösungen für die Minilysatpräparation von Plasmid-DNA ==== | ||
| **Lösung I:** (400 µL) | **Lösung I:** (400 µL) | ||
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| **Ethanol: 70%** (800 µL) | **Ethanol: 70%** (800 µL) | ||
| - | **ddH20 (Fresenius Wasser, DNase-freies Wasser)** | + | **ddH20 (Fresenius Wasser, DNase-freies Wasser)** |
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| - | ==== Rätsel: ==== | + | ==== Rätsel ==== |
| 3 Tubes mit den Lösungen I, II & III liegen vor einem. Die Beschriftung ist nicht mehr erkennbar. Wie kann man trotzdem feststellen, | 3 Tubes mit den Lösungen I, II & III liegen vor einem. Die Beschriftung ist nicht mehr erkennbar. Wie kann man trotzdem feststellen, | ||
| Line 44: | Line 49: | ||
| 2) Schütteln: Lösung II bildet Schaum wegen SDS. | 2) Schütteln: Lösung II bildet Schaum wegen SDS. | ||
| - | 3) Lösung 1 bleibt übrig. | + | 3) Lösung 1 bleibt |
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| ==== Durchführung: | ==== Durchführung: | ||
| - | 1. Bakterien werden aus 3 ml ONC geerntet. Dazu 1,5 ml ONC in ein Eppendorfgefäß | + | 1. Bakterien werden aus 3 ml ONC geerntet. Dazu 1,5 ml ONC in ein Mikroreaktionsgefäß |
| (Eppi) füllen und 1 min x 10,000 rpm in der Tischzentrifuge zentrifugieren. Entfernen | (Eppi) füllen und 1 min x 10,000 rpm in der Tischzentrifuge zentrifugieren. Entfernen | ||
| des Überstands. Erneut 1,5 ml ONC in Eppi füllen und Zentrifugation wiederholen. | des Überstands. Erneut 1,5 ml ONC in Eppi füllen und Zentrifugation wiederholen. | ||
| Line 63: | Line 68: | ||
| 4. Zugabe von vorgekühlter (Eis!) 400 µl 2,8M Kaliumacetatlösung, | 4. Zugabe von vorgekühlter (Eis!) 400 µl 2,8M Kaliumacetatlösung, | ||
| - | (kippen/ invertieren), | + | (kippen/ |
| Das Eppi 15 min auf Eis stellen. | Das Eppi 15 min auf Eis stellen. | ||
| Line 69: | Line 74: | ||
| 6. ca. 800 µl Überstand wird ohne Flocken in ein frisches Eppi überführt, | 6. ca. 800 µl Überstand wird ohne Flocken in ein frisches Eppi überführt, | ||
| - | Isopropanol gemischt (kippen/ invertieren), | + | Isopropanol gemischt (kippen/ |
| 7. Zentrifugation für 15 Minuten bei 4°C und 10.000 rpm (Eppendorf-Zentrifuge), | 7. Zentrifugation für 15 Minuten bei 4°C und 10.000 rpm (Eppendorf-Zentrifuge), | ||
| Line 80: | Line 85: | ||
| 9. 3 µl der gelösten Plasmid DNA werden in ein neues Eppi überführt und für nachfolgende | 9. 3 µl der gelösten Plasmid DNA werden in ein neues Eppi überführt und für nachfolgende | ||
| - | Schnitt-Kontrollen | + | Schnittkontrollen |
| - | 10. 15µl der restlichen Plasmid DNA für den Restriktionsansatz verwenden und die | + | 10. 15µl der restlichen Plasmid-DNA für den Restriktionsansatz verwenden und die |
| verbleibende Plasmid DNA bei -20°C aufbewahren. Eppis gut beschriften! | verbleibende Plasmid DNA bei -20°C aufbewahren. Eppis gut beschriften! | ||
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| + | Quellenangabe: | ||
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